Nouveau rôle du protéasome dans l’assemblage des complexes d’activation de NF-kappaB : application potentielle pour le traitement du myélome multiple

Le centre est une unité de recherche créée conjointement en janvier 2014, par l'Université Pierre et Marie Curie (UPMC), l'Institut national de la santé et de la recherche médicale (INSERM U1135) et le Centre national de la recherche scientifique (CNRS).

Le Cimi-Paris a pour objectif la compréhension des fonctions du système immunitaire dans les conditions normales et/ou pathologiques dues à des agents infectieux.

Le centre rassemble des compétences scientifiques et cliniques en formation et en recherche dans les domaines de l'immunologie, de l'inflammation, de la microbiologie, des interactions hôte-pathogène et de la vaccinologie.

Cimi-Paris est localisé à la Faculté de Médecine Pierre et Marie Curie, à l'Hôpital de la Pitié-Salpêtrière. Cet environnement est particulièrement propice pour les collaborations cliniques dans le domaine des maladies infectieuses, des greffes, en hématologie, en immunologie, et en médecine interne.

Le myélome multiple (MM) est une hémopathie incurable dont les rechutes et les résistances aux traitements sont fréquentes. Cette maladie se caractérise par une prolifération anormale de plasmocytes dans la moelle osseuse, entraînant lésions osseuses, insuffisance rénale, anémie, hypercalcémie et infections récurrentes. Le diagnostic repose généralement sur la détection d'une immunoglobuline monoclonale et d'un taux élevé de plasmocytes tumoraux dans la moelle osseuse. En France, 5 000 nouveaux cas de MM sont diagnostiqués chaque année. L'inhibiteur du protéasome bortézomib (BTZ) a considérablement amélioré le pronostic des patients, mais ses effets secondaires et sa perte d’efficacité anti-tumorale rendent nécessaire la recherche d’alternatives thérapeutiques. L’effet anti-tumoral des inhibiteurs du protéasome vient en grande partie du fait qu’ils inhibent la voie de signalisation NF-kappaB qui est fortement activée dans les cellules cancéreuses et qui participe à leur survie.

Nous avons découvert un nouveau mécanisme de régulation de la voie NF-kappaB faisant intervenir des effecteurs du protéasome. En effet, nous avons observé que le traitement de cellules tumorales avec certaines cytokines induisait la formation de complexes d’activation de NF-kappaB et découvert par un criblage de siRNAs, que le système ubiquitine-protéasome jouait un rôle important dans la formation de ces complexes. Par ailleurs, un deuxième criblage avec une banque de médicaments (1200 molécules approuvés par la FDA) nous a permis d’identifier des composés qui empêchent la formation des complexes et l’activation de la voie NF-kappaB. L'objectif de ce projet sera de comprendre, en s’appuyant sur nos résultats de criblage, comment les inhibiteurs du protéasome inhibent la formation des complexes d’activation de NF-kappaB et d’identifier des cibles thérapeutiques capables de contourner les mécanismes de résistance au BTZ dans le MM. Cette étude qui visera à tester des composés inhibiteurs de NF-kappaB et à manipuler l’expression de nouveaux régulateurs de cette voie de signalisation se fera sur des lignées cellulaires humaines de MM, sensibles ou résistantes aux inhibiteurs du protéasome, ainsi que sur des plasmocytes médullaires de patients nouvellement diagnostiqués avec un myélome multiple ou en rechute.

Le projet de stage s’intégrera dans ce projet de recherche et mettra en œuvre des techniques de biologie cellulaire et moléculaire, associé à des approches d’imagerie et de cyrtométrie.

Études en Biologie Cellulaire et Moléculaire. Orientation Cancérologie et Immunologie.

Motivé par effectuer une thèse (différentes sources de financement possibles, post-stage)

Thechniques mises en oeuvre (non exhaustif): 

Biologie cellulaire et moléculaire: culture de lignées de cellules, cellules primaires cancéreuses (moélle osseuse), traitment de cellules, génération de cellules knockout et knockin par l'approche CRISPR/Cas9, transfection (ADN et siRNA), immunofluorescence, clonage d'ADN, tests de viabilité cellulaire

Biochimie: Wester Blot, Immunoprécipitation, essais enzymatiques

Imagerie: immunofluorescence, miscroscopie classique et confocale, miscroscopie en temps réel

Cytométrie: Marquages extra- et intra-cellulaire, tri cellulaire